在NEST細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的胎牛血清，常使用的BI胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實驗的結(jié)果，我們在實驗中使用10%的BI澳洲胎牛血清培養(yǎng)NEST細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的BIFBS或者20%的BI胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的BI胎牛血清濃度。

 

　　首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的）

 

　　其次，把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時間點觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個時間點，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長情況以及形態(tài)。

 

　　如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點的時候再傳。反之亦然。老化的會比較多，對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在NEST細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的時候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長空間密度問題.